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摘要：旨在对基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）家族成员中的TIMP1进行克隆和分析，通过过表达与敲减TIMP1，探究TIMP1对毛囊毛乳头细胞（dermal papilla cells，DPCs）毛囊生长相关基因的调控作用。本研究通过分子克隆TIMP1 编码区（coding sequence，CDS）序列，并对其进行生物信息学功能分析。之后，构建过表达载体pcDNA 3.1-TIMP1并设计合成siRNA，在DPCs中过表达和敲低TIMP1，检测毛囊生长发育相关基因的表达，并通过EdU和CCK-8检测DPCs的增殖水平。结果显示，兔TIMP1基因的CDS区全长624 bp，共编码207个氨基酸。生物信息学分析表明TIMP1蛋白存在信号肽，不包含跨膜结构域，在不同哺乳动物中存在同源性。在DPCs中过表达TIMP1能够极显著上调BMP2（bone morphogenetic protein 2）、SFRP2（secreted frizzled-related protein 2）、TGFβ1（tranforming growth factorβ1）基因的mRNA表达水平（P<0.01），极显著下调WNT2（wnt family member 2）基因的mRNA表达水平（P<0. 01），敲减TIMP1能显著下调BMP2、SFRP2基因的mRNA的表达（P<0. 05），极显著下调TGFβ1基因的mRNA表达（P<0. 01）。此外，EdU和CCK-8结果显示过表达TIMP1能够抑制DPCs的增殖，敲低TIMP1能够促进DPCs的增殖。本研究成功克隆家兔TIMP1基因CDS序列，并对其生物信息学功能进行预测，初步分析TIMP1对毛囊生长相关基因的调控作用，验证了其抑制DPCs增殖的作用，为阐明家兔毛囊生长发育的理论研究提供参考。
文章目录
1 材料与方法
1.1 试验动物
1.2主要试剂
1.3 家兔DPCs的培养与转染
1.4 RNA的提取和cDNA的合成
1.5 TIMP1过表达载体和干扰载体的构建
1.6 TIMP1的生物信息学分析
1.7 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）
1.8 细胞增殖检测
1.9 数据统计与分析
2.结 果
2.1 TIMP1克隆与生物学信息分析
2.2 TIMP1蛋白结构预测
2.3 TIMP1基因系统进化树分析
2.4 TIMP1对毛囊发育相关基因的调控
2.5 TIMP1影响DPCs的增殖
3.讨 论
4.结 论
