文件大小：1.08M
摘要：3-岩藻糖基乳糖（3-fucosyllactose，3-FL）作为人乳寡糖（human milk oligosaccharides，HMOs）中的主要成分之一，约占HMOs的5%，具有调节肠道菌群、提供免疫支持和促进大脑发育的功能。目前对3-FL合成的研究多集中在大肠杆菌中，该研究通过引入来自Kluyveromyces lactis的lac12、来自Mortierella alpina的gmd和gmer，以及筛选6种3-岩藻糖基转移酶（α1，3-Fut），最终选择引入来自Neobacillus cucumis的fut3Bc，首次实现了在解脂耶氏酵母中合成3-FL，产量达0.66 g/L。进一步通过过表达相关基因，确定了由Fut3Bc催化的代谢反应是3-FL合成的限速步骤。随后，通过对fut3Bc添加SUMO标签和多拷贝表达SUMO-fut3Bc，3-FL产量提升至2.28 g/L。最后，通过增强NADPH的供应，3-FL产量进一步提高至2.84 g/L，经5 L发酵罐补料分批发酵后，产量达14.70 g/L。该研究探索了在解脂耶氏酵母中生产3-FL的可行性，为构建人乳寡糖细胞工厂提供了参考。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 菌种
1.1.2 主要试剂
1.1.3 培养基
1.2 实验方法
1.2.1 质粒构建和菌株构建
1.2.2 发酵方法
1.2.3 产物检测
2 结果与分析
2.1 3-FL代谢途径的构建
2.2 3-FL代谢途径限速步骤的判断
2.3 对Fut3Bc添加蛋白标签并多拷贝
2.4 优化氧化还原辅因子供应模块
2.5 发酵罐补料分批发酵
3 结论与讨论
