文件大小：0.82M
摘要：AtYbeY是拟南芥（Arabidopsis thaliana）含有PF0054和HAD的双结构域蛋白,行使内切核糖核酸酶功能,参与叶绿体rRNA加工和成熟,在70S核糖体的组装和核糖体的质量控制方面起到重要作用。基于TAIR公布的AtYbeY基因序列,同源克隆了PF0054结构域和HAD结构域的基因片段,利用双酶切法成功构建了pET32a-UPF0054和pET32a-HAD原核表达载体,成功表达了2个重组蛋白,经Ni2+亲和层析法纯化重组蛋白,SDS-PAGE结果显示,目标蛋白分子量与预期值一致,纯化的目标蛋白满足免疫抗原要求。Western blot检测结果表明,制备的AtYbeY-UPF0054与AtYbeY-HAD 2个多克隆抗体可以与拟南芥和玉米（Zea mays）叶片中的YbeY抗原蛋白具有良好的特异性免疫反应,制备的2个抗体具有较好的特异性和保守性。该研究将为拟南芥AtYbeY蛋白功能的解析和不同结构域的进化系统分析奠定基础。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 方法
1.2.1 引物设计与合成。
1.2.2 UPF0054结构域和HAD结构域的基因克隆。
1.2.3 pET32a-UPF0054和pET32a-HAD原核表达载体的构建。
1.2.4 pET32a-UPF0054和pET32a-HAD重组蛋白的诱导表达。
1.2.5 pET32a-UPF0054和pET32a-HAD重组蛋白的纯化。
1.2.6 重组蛋白多克隆抗体的制备与特异性和保守性分析。
2 结果与分析
2.1 拟南芥AtYbeY蛋白UPF0054和HAD结构域基因的克隆与T载体构建
2.2 pET32a-UPF0054和pET32a-HAD原核表达载体的构建
2.3 pET32a-UPF0054和pET32a-HAD原核表达载体的诱导表达和可溶性分析
2.4 pET32a-UPF0054和pET32a-HAD重组蛋白的纯化和免疫特异性
2.5 AtYbeY-UPF0054与AtYbeY-HAD多克隆抗体植物体内的保守性分析
3 结论与讨论
