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摘要：目的：探讨miR-296-3p通过靶向锌指和BTB结构域蛋白20（ZBTB20）对大鼠肝星状细胞HSC-T6活化的调控作用。方法：采用qRT-PCR检测经过转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激的大鼠肝星状细胞HSC-T6中纤维化标志物和miR-296-3p的表达水平；利用脂质体转染法将miR-296-3p mimic/inhibitor及各自的对照转染到HSC-T6细胞中，分组为：mimic NC组、miR-296-3p mimic组、inhibitor组和miR-296-3p inhibitor组，并且通过qRT-PCR、Western Blot、CCK-8、集落形成和Transwell实验检测转染miR-296-3p mimic/inhibitor后对HSC-T6细胞活化能力的影响；利用生物信息学方法预测miR-296-3p的候选靶基因，并用双荧光素酶基因报告实验进行验证；qRT-PCR和Western Blot实验检测miR-296-3p与候选靶基因ZBTB20之间的靶定关系；qRT-PCR、CCK-8及Transwell实验分析pcDNA3.1-ZBTB20能否逆转miR-296-3p+mimics对HSC-T6细胞活化能力的抑制作用。结果：HSC-T6细胞被TGF-β1刺激后进一步活化，并且活化的细胞中的miR-296-3p表达水平下调；miR-296-3p抑制HSC-T6的增殖、迁移，降低肝纤维化（HF）标志物I型胶原蛋白（Col1A1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平；通过生物信息学数据库预测以及双荧光素酶基因报告实验验证显示ZBTB20是miR-296-3p的功能靶基因，并且在HSC-T6中miR-296-3p负调控ZBTB20的表达；过表达ZBTB20可以部分逆转过表达miR-296-3p对HSC-T6活化的抑制作用。结论：miR-296-3p通过靶向抑制ZBTB20的表达从而抑制HSC-T6细胞的进一步活化。
文章目录
1 材料和方法
1.1 材料
1.2 实验方法
1.2.1 细胞培养
1.2.2 细胞转染
1.2.3 生物信息学网站筛选靶基因
1.2.4 双荧光素酶基因报告实验
1.2.5 CCK-8实验
1.2.6 集落形成实验
1.2.7 Transwell实验
1.2.8 qRT-PCR
1.2.9 Western Blot实验
1.2.10 统计分析
2 结果
2.1 miR-296-3p在活化的HSC-T6细胞中表达下调
2.2 miR-296-3p 转染有效性检测
2.3 miR-296-3p抑制HSC-T6细胞的增殖能力
2.4 miR-296-3p抑制HSC-T6细胞的迁移能力
2.5 miR-296-3p抑制HSC-T6细胞活化
2.6 ZBTB20是miR-296-3p的功能靶基因
2.7 miR-296-3p抑制ZBTB20的表达
2.8 ZBTB20部分逆转miR-296-3p对HSC-T6细胞增殖的抑制作用
2.9 ZBTB20部分逆转miR-2
