文件大小：1.16M
摘要：灵芝孢子多糖（GLSP）是灵芝孢子的主要有效成分，具有调节免疫、抑制肿瘤生长的药理作用。癌因性疲乏是癌症患者常见的伴随症状，目前尚无针对其安全有效的治疗策略。该研究通过建立脾虚证癌因性疲乏病证结合小鼠模型，研究灵芝孢子多糖改善癌因性疲乏的作用及机制，探讨灵芝孢子健脾益气的物质基础。首先，采用水提醇沉法提取GLSP，硫酸蒽酮法检测其含量约为75%，1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化-HPLC检测GLSP由葡萄糖、半乳糖、甘露糖等10种单糖组成。进而联合脾虚证癌因性疲乏小鼠模型，研究表明GLSP能明显减少小鼠肿瘤体积及质量，增加跑步时间，增加胃窦组织胃动素和胃泌素含量，提升小鼠胃肠消化功能；降低血清乳酸含量，增加骨骼肌ATP浓度、线粒体呼吸酶Ⅰ和线粒体呼吸酶Ⅳ含量，促进机体物质和能量代谢。此外，GLSP能明显减轻模型小鼠脾脏组织结构异常并促进肿瘤组织坏死，降低血清炎症因子水平[白细胞介素（IL）-1β、IL-6、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子（TNF）-α]，增加脾脏组织CD4+表达，降低CD8+表达，并降低Janus激酶2（JAK2）/信号转导和转录激活因子3?（STAT3）通路相关mRNA和蛋白表达。综上所述，GLSP可通过降低IL-6表达抑制JAK2/STAT3激活，提高CD4+/CD8+水平，调控肿瘤免疫微环境，增强免疫力，提高小鼠胃肠吸收和消化功能，促进能量代谢，提高骨骼肌储能水平，从而缓解脾虚证小鼠癌因性疲乏。该研究揭示灵芝孢子健脾益气改善癌因性疲乏的物质基础及作用机制，为其临床应用提供科学依据。
文章目录
1 材料
1.1 动物及细胞
1.2 药物及试剂
2 方法
2.1 GLSP的分离纯化
2.2 GLSP含量测定
2.3 GLSP单糖组成
2.4 动物分组及给药
2.5 CRF脾虚证动物模型制备
2.6 指标检测
2.6.1 抓力
2.6.2 跑步机测试
2.6.3 小鼠脾脏指数测定
2.6.4 小鼠肿瘤质量和体积测定
2.6.5 小鼠脾脏和肿瘤苏木素-伊红(HE)染色
2.6.6 小鼠脾脏组织CD4+、CD8+水平分析
2.6.7 小鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ、LA、LDH、D-木糖含量测定
2.6.8 小鼠MTL、GAS水平检测
2.6.9 小鼠骨骼肌ATP浓度、线粒体呼吸酶Ⅰ、线粒体呼吸酶Ⅳ活性含量测定
2.6.10 RT-qPCR法检测肿瘤组织JAK2和STAT3 mRNA表达
2.6.11 Western blot法检测肿瘤组织JAK2/STAT3通路相关蛋白表达
2.7 统计学分析
3 结果
