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　　摘要：为探究槐角苷(sophoricoside，Sop)、葛根素(puerarin，Pue)、芒果苷(mangiferin，Man)、曲酸(kojic acid，KA)对酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)的联合抑制作用，通过联合作用指数、竞争结合实验确定协同抑制作用组合及其添加顺序，借助多光谱法探究联合作用机制。结果表明：Pue+Sop、Sop+KA、KA+Man组合发挥协同抑制作用，添加顺序为TYR-Pue-Sop、TYR-Sop-KA、TYR-KA-Man。联合作用时均发生静态猝灭，即形成了酶-双抑制剂三元复合物；TYR-Pue-Sop较TYR-Sop的结合常数无较大差别，n≈1，说明两者结合位点不同；结合常数的增加和粒径的降低表明Sop、KA分别促进了TYR-KA、TYR-Man的结合，使其结合更加紧密。抑制剂1(Inhibitor 1，I1)的存在并没有改变抑制剂2(Inhibitor 2，I2)原有的作用力类型，TYR-Pue-Sop以静电相互作用为主，TYR-Sop-KA以氢键和范德华力为主，TYR-KA-Man以疏水相互作用为主要驱动力。红外光谱显示，TYR-Sop-KA、TYR-Pue-Sop趋于向无序化方向转变，TYR-KA-Man的结构更加不稳定。差示扫描量热法结果显示，复合抑制剂的Tm值均低于单抑制剂，表明联合抑制时TYR的热稳定性降低。结论：I1使I2结合常数的增加及热稳定性的降低是双抑制剂产生协同作用的一些原因。

　　文章目录

　　1 材料与方法

　　1.1 材料与试剂

　　1.2 仪器与设备

　　1.3 实验方法

　　1.3.1 联合作用指数测定

　　1.3.2     抑制剂与TYR的竞争结合实验

　　1.3.3 不同添加顺序下的联合组合抑制能力验证

　　1.3.4 粒径

　　1.3.5 红外光谱测定

　　1.3.6 热稳定性测定

　　1.3.7 数据处理

　　2 结果与分析

　　2.1 联合抑制作用分析

　　2.2 联合抑制作用下添加顺序的确定

　　2.3 荧光光谱

　　2.4 TYR的粒径变化

　　2.5 红外光谱

　　2.6 不同抑制剂作用下TYR的差示扫描量热曲线

　　3 结 论